 Über 30 Zimmer verteilt befinden sich eine große Anzahl italienischer Gemälde sowie Skulpturen aus dem späten 18. Jahrhundert bis zu solchen aus dem frühen 20. Jahrhundert. Die Sammlung im obersten Stockwerk des Pitti Palastes ist an die Kostümgalerie angeschlossen und wurde Ende des 18. Jahrhunderts von Leopold von Lothringen eingerichtet. Durch spätere Ankäufe und Schenkungen wurde die Sammlung stets erweitert.
In der Sammlung befinden sich Meisterwerke der Macchiaoli. Darunter Werke Giovanni Fattoris, Silvestro Legas, Telemaco Signorinis und Michele Gordigianis. Die bevorzugten Motive dieser anti-akademischen Künstlergruppe waren Schlachtfelder mit verletzten Soldaten, die toskanische Küste in der Gegend um Castiglioncello, elegante Damen in Cafés, am Klavier sitzend oder beim Spazierengehen mit Freunden sowie junge Mädchen wie Alaide Banti im berühmten Gemälde Boldinis. Der Stil der Macchiaoli, soweit man diesen mit dem der Impressionisten vergleichen kann, schuf seine eigene, sehr intensive Art des Malens.
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